结合态淀粉合成酶 (GBSS)试剂盒 说明 技术文章

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结合态淀粉合成酶 (granule-bound starch synthase,gbss)试剂盒商品货号:qs3405
英文名称:granule-bound starch synthase assay kit
别名:结合态淀粉合成酶试剂盒 gbss kit 结合态淀粉合成酶(gbss)试剂盒
检测方法:常量法
商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
qs3405-25管/24样 索桥生物 25管/24样 ¥2000.00元
qs3405-50管/48样 索桥生物 50管/48样 ¥3200.00元
产品详细介绍
测定意义:
gbss(ec 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。
测定原理:
gbss催化adpg与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成adp;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化nadp+还原为nadph,其中nadph生成量与前一步反应生成的adp数量呈正比,通过340nm下测定nadph的增加量,可以计算gbss活性。
产品说明书
货号:qs3405-50 规格:50 管/48 样
结合态淀粉合成酶 (granule-bound starch synthase,gbss)试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
gbss(ec 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链 淀粉的合成。
测定原理:
gbss催化adpg与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成adp; 进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 nadp+还 原为 nadph,其中 nadph 生成量与前一步反应生成的 adp 数量呈正比,通过 340nm 下测定 nadph 的增加量,可以计算 gbss 活性。
自备实验用品及仪器:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 60ml×2 瓶,4℃保存;
液体一:7ml×2 瓶,4℃保存;
液体二:4ml×2 瓶,4℃保存;
液体三:8ml×2 瓶,4℃保存;
粉剂一:2 支,4℃保存;
粉剂二:2 支,4℃保存;
粉剂三:2 支,-20℃保存;
粉剂四:2 支,4℃保存;
粉剂五:2 支,4℃保存;
粉剂六:2 支,-20℃保存;
粉剂七:2 支,-20℃保存;
粉剂八:2 支,4℃保存;
粉剂九:2 支,4℃保存;
粉剂十:2 支,-20℃保存;
试剂一:液体×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μ l 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μ l 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
反应液ⅰ的配制:临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支,依次把粉剂一、粉 剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
反应液ⅱ的配制:临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支,依次把粉 剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存, 禁止反复冻融。
反应液ⅲ的配制:临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支,依次把粉剂八、粉 剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
粗酶液制备:
称取 0.1~0.2g 组织(建议称取约 0.1g 组织),加入 1ml 提取液,冰浴中匀浆。10000g , 4℃离心 10min,弃上清,在沉淀中加入 1ml 提取液充分混匀,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、在 ep 管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μ l) 测定管
样本 150
反应液ⅰ 270
混匀,30℃保温 20 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却
反应液ⅱ 150
混匀,30℃保温 30 min,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失), 冰浴冷却,10000g 25℃离心 10min,取上清液
上清液 450
反应液ⅲ 300
试剂一 10
试剂二 10
混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 a1 和 2min 后的吸光度 a2,计算 δ a=a2-a1。
注意:反应液ⅰ如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。
gbss 活性计算:
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol nadph 定义为一个酶活力单位。 gbss(nmol/min/mg prot)=[δ a×v 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(v 样×cpr) ÷t×稀释倍数 =522×δ a÷cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol nadph 定义为一个酶活力单位。
gbss 活性(nmol/min/g 鲜重)=[δ a×v 反总÷(ε ×d)×109 ]÷(w ×v 样÷v 样总)÷t× 稀释倍数=522×δ a÷w
v 反总:反应体系总体积,5.7×10-4 l;ε :nadph 摩尔消光系数,6.22×103 l / mol /cm; d:比色皿光径,1cm;v 样:加入样本体积,0.15 ml;v 样总:加入提取液体积,1 ml;t: 反应时间,2 min;稀释倍数:1.71;cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;w:样本质量。
淀粉系列       单价 
qs3400 淀粉含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 260
ms3400 淀粉含量测试盒 微量法 100管/96样 500
qs3401 α-*测试盒 可见分光光度法 50管/24样 250
ms3401 α-*测试盒 微量法 100管/48样 480
qs3402 β-*测试盒 可见分光光度法 50管/24样 460
ms3402 β-*测试盒 微量法 100管/48样 900
qs3403-50 adpg焦磷酸化酶(agp)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 2300
qs3403-25 adpg焦磷酸化酶(agp)测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 1600
ms3403 adpg焦磷酸化酶(agp)测试盒 微量法 100管/96样 4400
qs3404-50 可溶性淀粉合成酶(sss)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 3200
qs3404-25 可溶性淀粉合成酶(sss)测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 2000
ms3404 可溶性淀粉合成酶(sss)测试盒 微量法 100管/96样 6000
qs3405-50 结合态淀粉合成酶(gbss)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 3200
qs3405-25 结合态淀粉合成酶(gbss)测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 2000
ms3405 结合态淀粉合成酶(gbss)测试盒 微量法 100管/96样 6000
qs3406 淀粉分支酶(sbe)测试盒 可见分光光度法 50管/24样 850
ms3406 淀粉分支酶(sbe)测试盒 微量法 100管/48样 1600

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