干货 | 病毒滴度检测，除了空斑试验还有更好的选择
什么是病毒滴度呢？就像重组蛋白合成以后需要检测纯度一样，病毒包装后的效力如何，如何定量，也是必须要检测的，专业术语称为：病毒滴度的测定。病毒滴度是指单位体积液体中具有生物活性的病毒颗粒数，是衡量病毒数量和毒力的一个重要指标。病毒滴度测定是指确定给定样品中病毒颗粒的浓度的过程。它是评估病毒产品，如疫苗、基因治疗载体或诊断试剂的质量和效力的一个重要参数。
病毒滴度检测方法比较病毒滴度的测定方法有多种，主要分为物理方法和生物方法两大类。物理方法是通过测定病毒颗粒的大小、形态、数量、电荷、光学性质等，来推算病毒滴度，如电子显微镜法、光散射法、荧光标记法等。生物方法是通过测定病毒对宿主细胞或动物的感染能力或致死能力，来推算病毒滴度，如空斑形成单位法、组织培养感染剂量法、半数致死剂量法等。不同的方法有不同的优缺点和适用范围，需要根据实验目的和条件选择合适的方法。
qpcr法在病毒滴度检测中的应用常用的检测方法为使用特异性抗体，通过荧光灶试验(ffa)、空斑试验或细胞培养半数感染量(ccid50)等来实现，但是这些方法均涉及特异性抗体制备困难、操作复杂且要求高、耗时长、主观性大、通量小等不足，不利于多价疫苗产品的精准配制和生产全过程的质量控制。空斑试验被认为是测定病毒感染性的金标准，但它耗时、劳力密集，且需要每种病毒的适宜细胞系和空斑形成。
相比之下，qpcr是一种简单的、高通量的测定纯化病毒样本中病毒颗粒数的方法。基于核酸的定量检测方法具有试剂材料可及性强、可操作性强、一致性高、耗时短、通量大、结果更加客观等优点，已经成功应用于甲型肝炎、腮腺炎病毒疫苗、aav基因治疗药物等。
如msd rotateq（口服轮状病毒疫苗）使用的就是基于细胞感染的核酸定量检测方法（qpcr法），但由于疫苗毒株不同，基因序列不同，细胞感染特点也不同，该方法需要针对不同疫苗毒株进行不同设计。
aav（腺相关病毒）基因治疗药物因其“一次给药，终身治愈”的特点，发展势头的强劲自不必多说，因此aav药物的质量控制（鉴别，纯度，含量与效价）至关重要。由于其生物学滴度的测定仍很繁琐，不同实验室使用各自的方法和参照，这些都会影响raav在临床上的应用，因此qpcr法因其优势在aav检测中应用更为广泛。
qpcr法检测原料分享翌圣生物作为生命科学工具供应商，长期为ivd企业提供高品质、高性价比的原料，目前已开发出各类探针法的qpcr/rt-qpcr检测通用原料，已被下游厂家应用于基因治疗和肿瘤治疗等多个领域中各种病毒载体药物或疫苗的鉴别和效力评价。
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