茁彩生物｜柠檬酸（CA）检测
柠檬酸（citric acid, ca），又称枸橼酸，是一种重要的有机酸，在自然界中分布很广，天然的柠檬酸存在于植物如柠檬、柑橘、菠萝等果实和动物的骨骼、肌肉、血液中。很多种水果和蔬菜，尤其是柑橘属的水果中都含有较多的柠檬酸，特别是柠檬和青柠含有大量柠檬酸。
目前，可采用分光光度法检测柠檬酸（ca）的含量。
分光光度法是基于物质对光的吸收特性进行的。当光线穿过物质时，会被物质吸收，且吸收程度与物质的浓度成正比。因此，通过测量光线通过物质时的吸光度，可以确定物质的浓度。在 ca 含量检测中，常用的分光光度法包括比色法、吸光光度法等。
一、样品中柠檬酸提取：
a.液体样品中柠檬酸提取：取0.1ml液体加试剂一0.9ml，充分混匀，11000g/min4℃离心10min， 取上清液，待测。
b.组织中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，11000g/min4℃离心10min，取上清液，待测。
c.线粒体中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，600g/min，4℃离心5min；取上清至另一ep管中，11000g/min，4℃离心10min，弃上清（此上清液可用于细胞质ca含量测定）；向沉淀中加试剂二200µl，以及试剂三2µl，充分悬浮溶解，11000g/min，4℃离心10min，取上清液，待测。
二、测定：
1.分光光度计预热30 min以上，调节波长到545 nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于30℃水浴中预热30min 以上。
3.按下图在1.5mlep管中加入相应试剂
试剂名称（µl）
空白管
测定管
标准管
蒸馏水
100
上清液
100
标准品
100
试剂一
700
试剂四
100
试剂五
100
充分混匀后室温静置30min，于545nm测定吸光度，记为a空白管、a测定管、a标准管。
关键词：分光光度计
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分光光度法是基于物质对光的吸收特性进行的。当光线穿过物质时，会被物质吸收，且吸收程度与物质的浓度成正比。因此，通过测量光线通过物质时的吸光度，可以确定物质的浓度。在 ca 含量检测中，常用的分光光度法包括比色法、吸光光度法等。
一、样品中柠檬酸提取：
a.液体样品中柠檬酸提取：取0.1ml液体加试剂一0.9ml，充分混匀，11000g/min4℃离心10min， 取上清液，待测。
b.组织中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，11000g/min4℃离心10min，取上清液，待测。
c.线粒体中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，600g/min，4℃离心5min；取上清至另一ep管中，11000g/min，4℃离心10min，弃上清（此上清液可用于细胞质ca含量测定）；向沉淀中加试剂二200µl，以及试剂三2µl，充分悬浮溶解，11000g/min，4℃离心10min，取上清液，待测。
二、测定：
1.分光光度计预热30 min以上，调节波长到545 nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于30℃水浴中预热30min 以上。
3.按下图在1.5mlep管中加入相应试剂
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100
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试剂一
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100
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