琼脂糖核酸电泳,选择紫外还是蓝光?

dna分子是一种自身不会发出荧光的大分子,需要相应的核酸分子染料结合到dna分子的大沟处,通过激发光激发dna –核酸染料复合物,复合物会发出一束强荧光,通过相应的滤光片过滤得到单波长的发射光,通过照相机或者肉眼捕获就能够检测到相应的dna分子。那么琼脂糖核酸电泳要选择紫外还是蓝光呢?让我们一起来看看吧!
从核酸电泳发展至今,绝大多数的分子生物学实验室选择溴化乙锭(etbr,也简称eb)作为核酸分子染料,由于eb的光谱特性,又不得不选择紫外光作为激发光。eb分子因其分子量较小,容易透过细胞膜,因此是一种致癌性ji强的有机小分子。而紫外光(uv)照射也会诱发基因突变,不仅会引发实验样品的基因突变,也会对实验人员造成一定的伤害。
为了解决eb分子的致癌问题,科研工作者通过有机合成技术将两个eb分子通过有机分子链连在了一起,解决了eb分子因分子量比较小容易通过细胞膜的问题,连在一起的分子被称为gelred。这虽然解决了染料相对安全的问题,可激发光依然是uv,不能够从本质上解决对实验样品和实验操作者自身的安全问题。
事实上,除了eb和gelred这两种以uv为激发光的核酸分子染料,还存在另一类核酸分子染料,如:gelgreen、sybr green、sybr gold、led green、sybr safe、goldview等以480nm蓝光为激发光的核酸染料,这类染料分子量相对较大,细胞膜通透性较差,因此对实验人员带来的危害较小,相对eb分子是一种较安全的核酸分子染料。
由于波长470nm蓝光属于可见光,不会对实验样品造成破坏,也不会对实验人员造成危害,因此470nm的蓝光搭配安全核酸分子染料能够zui大程度降低核酸琼脂糖凝胶电泳带来的潜在危险。
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