鸡传染性喉气管炎病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
通用名：鸡传染性喉气管炎病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：test kit for antibodies to avian infectious laryngotracheitis(elisa)
【包装规格】 96t×1/盒
【预期用途】鸡传染性喉气管炎是由传染性喉气管炎病毒(avian infectious laryngotracheitis， ailt)引起鸡的一种急性、高度接触传染性呼吸道传染病，本病呈世界性分布，是严重危害养禽业的主要疫病之一。疫苗免疫是预防和控制鸡传染性支气管炎发生的you效途径，而免疫后抗体水平的高低反映实际的疫苗免疫效果，直接关系到免疫鸡群对禽流感病毒的抵抗力。
本试剂盒适用于：鸡血清抗体的检测，以确定被检鸡是否感染过鸡传染性喉气管炎病毒或免疫鸡体内抗体水平；评估鸡群感染ailt的风险程度；了解雏鸡母源抗体水平，为ailt免疫程序的制定提供参考。
【原 理】
本试剂盒由预包被鸡传染性喉气管炎病毒重组n蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用间接酶联免疫法（elisa）原理检测鸡血清或血浆中鸡传染性喉气管炎病毒抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和待检血清，再加入hrp标记的检测抗体，经温育后，若样品中含有鸡传染性喉气管炎病毒的抗体，则将与酶标板上抗原抗体结合，经*洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；在孔中加底物液tmb，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有传染性喉气管炎病毒抗体。
【试剂盒组成】
序号
名称
规格/96t×1
1
微孔酶标板
96孔
2
阴性对照
0.3ml
3
阳性对照
0.3ml
4
*
6ml
5
检测抗体-hrp
10ml
6
20×洗涤缓冲液
25ml
7
底物a
6ml
8
底物b
6ml
9
终止液
6ml
10
封板膜
2张
11
说明书
1份
12
自封袋
1个
13
微孔酶标板
96孔
【储存及有效期】 2～8℃保存，有效期6个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，*需置-20℃保存。
2. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水.
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴性、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl；样品孔每孔加入待测样本50μl，空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（hrp）标记的检测抗体100μl，静置，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.甩去孔内液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μl），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔依次加底物液a、底物液b各50μl，盖好盖板膜，置37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μl，15min内，于450nm波长处测定各孔吸光值（a值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.2，阳性对照≥0.8。
【检验结果的解释】
1.c.o（临界值）=0.25+阴性对照孔均值。
2.未曾免疫鸡群：样品a值≥c.o为阳性；样品a值＜c.o为阴性。
3.免疫鸡群：监测并记录样本当时的抗体水平，根据结果分析抗体水平的分布及鸡群免疫状态的动向。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测鸡血清或血浆中鸡传染性喉气管炎病毒igg抗体，根据a值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
4.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，以防水滴凝聚在冷板条上。未用完酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
5.洗板不正确可以导致不准确的结果，在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
6.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净，消除板底残留的液体和手指印，否则影响od值。
7.用于检测的样品应保持新鲜。
8.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
9.不同批号试剂组分不得混用。
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