可溶性白细胞介素2受体检测实验
实验方法原理 将抗tac特异性单克隆抗体ab1吸附于固相载体，识别细胞培养上清或血清等标本中tac并与之结合。应用辣根过氧化物酶标记的识别另一种tac表位的特异性单克隆抗体ab2识别固定于固相载体的tac并与之结合。通过酶催化底物显色反映待检标本中游离tac的水平。
实验材料 抗体pha
试剂、试剂盒 缓冲液洗涤液稀释液终止液
仪器、耗材 塑料板检测仪水浴箱冰箱co2孵箱加样器
实验步骤
1. 刺激外周血单个核细胞（pbmc）
取外周血10 ml，肝素抗凝，常规分离单个核细胞，加至24 孔细胞培养板，2×106 /孔，rpmi1640-10％ fcs＋pha 3 μg/ml，wellcome公司，37 ℃、5 ％co2培养72 小时，收集上清，-20 ℃保存待测。同时设未加pha对照组。可选用病人血清为待测标本。
2. ab1包被
用0.05 m ph9.6碳酸盐包被缓冲液将抗tac特异性单克隆抗体（ab1）稀释至5 μg/ml，加至elisa板，100 μl/孔，4 ℃包被72 小时。
3. 封闭
1 ％bsa-pbs封闭，350 μl/孔，37 ℃孵育2小时。
4. 加样
elisa板用pbs-t洗液洗3次，pha刺激单个核细胞培养上清及对照组上清或病人血清倍比稀释至1∶1024，每一稀释度取100 μl加至elisa板。hut-102b2细胞培养上清为阳性对照，rpmi1640-10％fcs培养液为阴性对照。37 ℃，孵育2 小时，洗涤。
5. 加酶标抗体
于各反应孔加辣根过氧化物酶标记另一种抗 tac 特异性单克隆抗体ab2以效价滴定的稀释度稀释100 μl。37 ℃孵育2小时，洗涤。
6. 加底物显色
各反应孔加新鲜配制abts底物溶液100 μl，37 ℃，孵育15 分钟。
7. 终止反应
各反应孔加2 ％氟化钠终止液50 μl。
8. 结果判定
首先肉眼观察反应孔内颜色，稀释梯度是否均匀。阳性、u性结果是否明显。然后于elisa检测仪上测各孔od值（410 nm）。
收起
注意事项
1. 包被抗体活性要较高，否则影响本实验敏感性。
2. 经筛选比较，封闭液以1 ％bsa-pbs为好。
3. 酶标结合物应用前应进行效价滴定，选择工作浓度。
4. 底物应选用灵敏度较高的供氢体如abts等。
5. 如有条件，酶标mcab可由*-mcab和亲和素-hrp系统代替，以增加实验的敏感性。
瑞德华薯类滚笼清洗机（滚筒清洗机）使用、保养及维护说明
浸没式紫外线杀菌器是常见的消毒方法
我国电子测量仪器行业应向技术发展
BOULDER COUNTER空气尘埃粒子计数器产品配置
DYZJ270二手双螺旋压榨机 800型三足离心机介绍
可溶性白细胞介素2受体检测实验
影响钢丝拉力机缺口的因素有哪些？钢丝拉力强度试验机专业厂家告诉您
反渗透海水淡化设备应该如何清洗
烧柴油暖风机真有说的这么好？
FESTO电磁阀应急处理方法及选型技巧
冷热冲击试验箱在LED、电子测试仪器行业得到了迅速发展
大块岩石分裂 建筑物破拆
电线电缆主流的几项防御举措
公路超限超载检测流动电子地磅
近日聚氨酯保温板多少钱一方/价格
滚塑储罐加强筋的设计
LMD电动方形螺旋闸门的特点和主要零件材料及连接尺寸
自动锁螺丝机的电批批头为什么容易损坏?
德国RICKMEIER瑞克梅尔泵组件R5系列现货介绍
COD测定仪粉包试剂的配制
实验材料 抗体pha
试剂、试剂盒 缓冲液洗涤液稀释液终止液
仪器、耗材 塑料板检测仪水浴箱冰箱co2孵箱加样器
实验步骤
1. 刺激外周血单个核细胞（pbmc）
取外周血10 ml，肝素抗凝，常规分离单个核细胞，加至24 孔细胞培养板，2×106 /孔，rpmi1640-10％ fcs＋pha 3 μg/ml，wellcome公司，37 ℃、5 ％co2培养72 小时，收集上清，-20 ℃保存待测。同时设未加pha对照组。可选用病人血清为待测标本。
2. ab1包被
用0.05 m ph9.6碳酸盐包被缓冲液将抗tac特异性单克隆抗体（ab1）稀释至5 μg/ml，加至elisa板，100 μl/孔，4 ℃包被72 小时。
3. 封闭
1 ％bsa-pbs封闭，350 μl/孔，37 ℃孵育2小时。
4. 加样
elisa板用pbs-t洗液洗3次，pha刺激单个核细胞培养上清及对照组上清或病人血清倍比稀释至1∶1024，每一稀释度取100 μl加至elisa板。hut-102b2细胞培养上清为阳性对照，rpmi1640-10％fcs培养液为阴性对照。37 ℃，孵育2 小时，洗涤。
5. 加酶标抗体
于各反应孔加辣根过氧化物酶标记另一种抗 tac 特异性单克隆抗体ab2以效价滴定的稀释度稀释100 μl。37 ℃孵育2小时，洗涤。
6. 加底物显色
各反应孔加新鲜配制abts底物溶液100 μl，37 ℃，孵育15 分钟。
7. 终止反应
各反应孔加2 ％氟化钠终止液50 μl。
8. 结果判定
首先肉眼观察反应孔内颜色，稀释梯度是否均匀。阳性、u性结果是否明显。然后于elisa检测仪上测各孔od值（410 nm）。
收起
注意事项
1. 包被抗体活性要较高，否则影响本实验敏感性。
2. 经筛选比较，封闭液以1 ％bsa-pbs为好。
3. 酶标结合物应用前应进行效价滴定，选择工作浓度。
4. 底物应选用灵敏度较高的供氢体如abts等。
5. 如有条件，酶标mcab可由*-mcab和亲和素-hrp系统代替，以增加实验的敏感性。
瑞德华薯类滚笼清洗机（滚筒清洗机）使用、保养及维护说明
浸没式紫外线杀菌器是常见的消毒方法
我国电子测量仪器行业应向技术发展
BOULDER COUNTER空气尘埃粒子计数器产品配置
DYZJ270二手双螺旋压榨机 800型三足离心机介绍
可溶性白细胞介素2受体检测实验
影响钢丝拉力机缺口的因素有哪些？钢丝拉力强度试验机专业厂家告诉您
反渗透海水淡化设备应该如何清洗
烧柴油暖风机真有说的这么好？
FESTO电磁阀应急处理方法及选型技巧
冷热冲击试验箱在LED、电子测试仪器行业得到了迅速发展
大块岩石分裂 建筑物破拆
电线电缆主流的几项防御举措
公路超限超载检测流动电子地磅
近日聚氨酯保温板多少钱一方/价格
滚塑储罐加强筋的设计
LMD电动方形螺旋闸门的特点和主要零件材料及连接尺寸
自动锁螺丝机的电批批头为什么容易损坏?
德国RICKMEIER瑞克梅尔泵组件R5系列现货介绍
COD测定仪粉包试剂的配制