过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒说明书
过氧化氢酶（catalase，cat）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
测定意义：
cat(ec 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是zui主要的 h2o2清除酶，
在活性氧清除系统中具有重要作用。
测定原理：
h2o2在 240nm下有特征吸收峰，cat 能够分解 h2o2，使反应溶液 240nm下的吸光度随反
应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 cat活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：60ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：60ml×1瓶，4℃保存；
试剂二：100 ul×3瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104
个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细菌或细胞加入 1ml提
取液） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200w，超声 3s，间隔10s，重复30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g） ：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，
加入 1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至 240nm处，蒸馏水调零。
2、cat检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二（100 ul）中加入 20ml试剂一，充分混匀，
作为工作液；用不完的试剂 4℃保存一周；
3、测定前将 cat检测工作液 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴10min。
4、取 1mlcat检测工作液于 1ml石英比色皿中，再加入35μl样本，混匀；室温下立即测
定 240nm下的初始吸光值 a1和 1min后的吸光值 a2，计算 δa=a1-a2
cat 活性计算：
1、血清（浆）cat活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol h2o2降解定义为一个酶活力单位。
cat(u/ml)= [δa×v反总÷（ε×d）×109
]÷v样÷t=678×δa
2、组织、细菌或细胞中cat活力计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg组织蛋白每分钟催化1nmol h2o2降解定义为一个酶活力单位。
cat(u/mg prot)=[δa×v反总÷（ε×d）×109
]÷(v样×cpr) ÷t=678×δa÷cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g组织每分钟催化 1nmol h2o2降解定义为一个酶活力单位。
cat(u/g 鲜重)=[δa×v反总÷（ε×d）×109
]÷(w× v样÷v样总)÷t=678×δa÷w
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1nmol h2o2降解定义为一个酶活力单位。
cat(u/104
cell)＝[δa×v反总÷（ε×d）×109
]÷（500×v样÷v样总）÷t =1.356×δa
v反总：反应体系总体积，1.035×10-3
l；ε：h2o2摩尔消光系数，4.36×104
l / mol /cm；d：
比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.035 ml；v样总：加入提取液体积，1 ml；t：
反应时间，1 min；w：样本质量，g；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总
数，500 万。
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在活性氧清除系统中具有重要作用。
测定原理：
h2o2在 240nm下有特征吸收峰，cat 能够分解 h2o2，使反应溶液 240nm下的吸光度随反
应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 cat活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：60ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：60ml×1瓶，4℃保存；
试剂二：100 ul×3瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104
个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细菌或细胞加入 1ml提
取液） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200w，超声 3s，间隔10s，重复30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g） ：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，
加入 1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至 240nm处，蒸馏水调零。
2、cat检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二（100 ul）中加入 20ml试剂一，充分混匀，
作为工作液；用不完的试剂 4℃保存一周；
3、测定前将 cat检测工作液 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴10min。
4、取 1mlcat检测工作液于 1ml石英比色皿中，再加入35μl样本，混匀；室温下立即测
定 240nm下的初始吸光值 a1和 1min后的吸光值 a2，计算 δa=a1-a2
cat 活性计算：
1、血清（浆）cat活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol h2o2降解定义为一个酶活力单位。
cat(u/ml)= [δa×v反总÷（ε×d）×109
]÷v样÷t=678×δa
2、组织、细菌或细胞中cat活力计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg组织蛋白每分钟催化1nmol h2o2降解定义为一个酶活力单位。
cat(u/mg prot)=[δa×v反总÷（ε×d）×109
]÷(v样×cpr) ÷t=678×δa÷cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g组织每分钟催化 1nmol h2o2降解定义为一个酶活力单位。
cat(u/g 鲜重)=[δa×v反总÷（ε×d）×109
]÷(w× v样÷v样总)÷t=678×δa÷w
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1nmol h2o2降解定义为一个酶活力单位。
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cell)＝[δa×v反总÷（ε×d）×109
]÷（500×v样÷v样总）÷t =1.356×δa
v反总：反应体系总体积，1.035×10-3
l；ε：h2o2摩尔消光系数，4.36×104
l / mol /cm；d：
比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.035 ml；v样总：加入提取液体积，1 ml；t：
反应时间，1 min；w：样本质量，g；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总
数，500 万。
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