茁彩生物 通用的样本处理方法
土壤：
称取1g土壤，加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。
粪便：
称取1g粪便，加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。
咽拭子：
加入2g的ph7.2-7.4左右的pbs，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。
植物标本(精提):
1、称取0.1g（误差±3%以内）新鲜植物组织样本，在液氮中充分研磨；
2、加入1ml的提取液（80%甲醇）,置于-20度过夜；
3、于4度，8000rpm，离心20分钟，取上清；
4、上清液过c-18固相萃取柱。具体步骤是：80%甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用甲醇（5ml）洗柱→乙醚（5ml）洗柱→甲醇（5ml）洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用；
5、上样前加入ph7.4pbs缓冲液（1ml定容）。混匀后室温放置30分钟，然后4度离心（8000rpm，15分钟），取上清并暂时保存于4度待用。
植物标本(推荐):
用预冷的 pbs (0.01mol/l, ph=7.2-7.4)冲洗组织，去除残留物质（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 pbs（一般按 1:9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9ml 的 pbs，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在 pbs 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。last将匀浆液于 5000×g 离心 5~10 分钟，取上清检测。
牛奶：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
蜂蜜：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
培养的细胞:
a、动物细胞：用ph7.2-7.4的pbs稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
b、植物细胞：用ph7.2-7.4的pbs稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
c、组织的细胞切割标本后，称取1g组织，加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），去除上清，再用ph7.2-7.4左右的pbs小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。
尿液：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
脑脊液：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
样本收集注意事项:
1、不能检测含nan3的样品，因nan3抑制辣根过氧化物酶的（hrp）活性。
2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3、我们罗列的是通用的样本处理方法，无法涵盖各种样本，对于一些特殊样本，建议实验人员多参考已发表的文献，自行设计合理的样本处理方法。
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称取1g土壤，加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。
粪便：
称取1g粪便，加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。
咽拭子：
加入2g的ph7.2-7.4左右的pbs，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。
植物标本(精提):
1、称取0.1g（误差±3%以内）新鲜植物组织样本，在液氮中充分研磨；
2、加入1ml的提取液（80%甲醇）,置于-20度过夜；
3、于4度，8000rpm，离心20分钟，取上清；
4、上清液过c-18固相萃取柱。具体步骤是：80%甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用甲醇（5ml）洗柱→乙醚（5ml）洗柱→甲醇（5ml）洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用；
5、上样前加入ph7.4pbs缓冲液（1ml定容）。混匀后室温放置30分钟，然后4度离心（8000rpm，15分钟），取上清并暂时保存于4度待用。
植物标本(推荐):
用预冷的 pbs (0.01mol/l, ph=7.2-7.4)冲洗组织，去除残留物质（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 pbs（一般按 1:9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9ml 的 pbs，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在 pbs 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。last将匀浆液于 5000×g 离心 5~10 分钟，取上清检测。
牛奶：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
蜂蜜：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
培养的细胞:
a、动物细胞：用ph7.2-7.4的pbs稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
b、植物细胞：用ph7.2-7.4的pbs稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
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尿液：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
脑脊液：
用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
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1、不能检测含nan3的样品，因nan3抑制辣根过氧化物酶的（hrp）活性。
2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
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