影响酶促反应的因素:温度、PH及抑制剂作用
影响酶促反应的因素:温度、ph及抑制剂作用
酶作为生物催化剂与一般催化剂一样呈现温度效应。酶促反应开始时，反应速度随温度升高增快。达到最大反应速度时的温度称为某种酶的最适温度。由于绝大多数酶是又活性的蛋白质，当达到最适温度后，继续升高温度，引起蛋白质变性，酶促反应速度反而逐步下降，以致停止。
酶的最适温度不是一个常数，与作用时间长短有关。测定酶活性均在酶促反应最适温度下进行。大多数动物来源的酶最适温度为37-40℃，植物来源的酶最适温度为50-60℃。
酶的催化活性与环境ph有密切关系，通常各种酶只在一定ph范围内具有活性，酶活性最高时的ph，称为酶的最适ph。高于或低于此ph时酶的活性逐渐降低。
酶的最适ph不是一个特征物理常数，对于同一个酶，其最适ph因缓冲液和底物的性质不同而又差异。
在酶促反应过程中，抑制对酶的抑制作用可分为可逆抑制和不可逆抑制。可逆抑制有根据抑制剂和底物的关系分为三种类型;竞争性抑制，非竞争性抑制和反竞争性抑制。
实例如下：
一、试剂
5%三氯醋酸溶液。1mmol/l苯甲脒;称取19.25g苯甲脒，用少量水溶解，定容至100ml。
1%酪蛋白溶液;取1g酪蛋白，加0.1mol/l氢氧化钠溶液10ml、水40ml，置60℃水浴加入至溶解，放置室温后，加水稀释成100ml，并调至ph8.0.
0.1mol/l硼酸缓冲液;
a液，0.1mol/l硼酸(h2bo3);称取6.18gh3bo3溶于1000ml水中。
b液，0.025mol/l硼砂(na2b4o7·10h2o);
称取9.54g硼砂(na2b4o7·10h2o)溶液1000ml水中。
ph7.4硼酸缓冲液;90ml a液+10ml b液
ph8.0硼酸缓冲液;70ml a液+30ml b液
ph9.0硼酸缓冲液;20ml a液+80ml b液、
材料
酪蛋白酶溶液：50-200ug/ml，用0.1mol/l,ph8.0硼酸缓冲液配制。可用粗提的猪胰蛋白酶，用量根据实际测得比活值而定。
仪器：
试管1.5cm x15cm(x19);移液管1ml(x7)，2ml(x3)，5ml(x5);量筒100ml(x1)，恒温水浴(0℃);白瓷板;胶头滴管。
操作方法;
温度对酶活力的影响
取3只试管，按下表操作;
空白管;现在试管中加入1.0ml 1%酪蛋白溶液和3.0ml 5%三率醋酸溶液，摇匀后，再加入0.2ml酶液，0.8ml蒸馏水，在37℃保温10min。
将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较之。
ph对酶活力的影响
取3支试管按下表操作;
空白管;现在试管中加入1.0ml1%酪蛋白溶液和3.0ml5%三氯醋酸溶液，摇匀后，在加入0.2ml酶液，0.8ml蒸馏水，在37℃保温10min。
将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较值。
抑制剂对酶活力的影响
取3之试管，按下表操作;
空白管;现在试管中加入1.0ml1%酪蛋白溶液和3.0ml5%三氯酸溶液，摇匀后，再加入0.2ml酶液，0.8ml蒸馏水，在37℃保温10min。
将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较之。
注意事项;
1、由于胰蛋白酶活力不同，因此实验应随时检查反应进行情况。如反应进行的太快，应适当稀释酶液;则应减少酶溶液的稀释倍数。
2、注意不要在检查反应程度时使各管溶液混杂。
试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。
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酶的最适温度不是一个常数，与作用时间长短有关。测定酶活性均在酶促反应最适温度下进行。大多数动物来源的酶最适温度为37-40℃，植物来源的酶最适温度为50-60℃。
酶的催化活性与环境ph有密切关系，通常各种酶只在一定ph范围内具有活性，酶活性最高时的ph，称为酶的最适ph。高于或低于此ph时酶的活性逐渐降低。
酶的最适ph不是一个特征物理常数，对于同一个酶，其最适ph因缓冲液和底物的性质不同而又差异。
在酶促反应过程中，抑制对酶的抑制作用可分为可逆抑制和不可逆抑制。可逆抑制有根据抑制剂和底物的关系分为三种类型;竞争性抑制，非竞争性抑制和反竞争性抑制。
实例如下：
一、试剂
5%三氯醋酸溶液。1mmol/l苯甲脒;称取19.25g苯甲脒，用少量水溶解，定容至100ml。
1%酪蛋白溶液;取1g酪蛋白，加0.1mol/l氢氧化钠溶液10ml、水40ml，置60℃水浴加入至溶解，放置室温后，加水稀释成100ml，并调至ph8.0.
0.1mol/l硼酸缓冲液;
a液，0.1mol/l硼酸(h2bo3);称取6.18gh3bo3溶于1000ml水中。
b液，0.025mol/l硼砂(na2b4o7·10h2o);
称取9.54g硼砂(na2b4o7·10h2o)溶液1000ml水中。
ph7.4硼酸缓冲液;90ml a液+10ml b液
ph8.0硼酸缓冲液;70ml a液+30ml b液
ph9.0硼酸缓冲液;20ml a液+80ml b液、
材料
酪蛋白酶溶液：50-200ug/ml，用0.1mol/l,ph8.0硼酸缓冲液配制。可用粗提的猪胰蛋白酶，用量根据实际测得比活值而定。
仪器：
试管1.5cm x15cm(x19);移液管1ml(x7)，2ml(x3)，5ml(x5);量筒100ml(x1)，恒温水浴(0℃);白瓷板;胶头滴管。
操作方法;
温度对酶活力的影响
取3只试管，按下表操作;
空白管;现在试管中加入1.0ml 1%酪蛋白溶液和3.0ml 5%三率醋酸溶液，摇匀后，再加入0.2ml酶液，0.8ml蒸馏水，在37℃保温10min。
将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较之。
ph对酶活力的影响
取3支试管按下表操作;
空白管;现在试管中加入1.0ml1%酪蛋白溶液和3.0ml5%三氯醋酸溶液，摇匀后，在加入0.2ml酶液，0.8ml蒸馏水，在37℃保温10min。
将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较值。
抑制剂对酶活力的影响
取3之试管，按下表操作;
空白管;现在试管中加入1.0ml1%酪蛋白溶液和3.0ml5%三氯酸溶液，摇匀后，再加入0.2ml酶液，0.8ml蒸馏水，在37℃保温10min。
将样品管和空白管分别离心，3000r/min，5分钟，取上清液于280nm处测定各管的吸光值，并比较之。
注意事项;
1、由于胰蛋白酶活力不同，因此实验应随时检查反应进行情况。如反应进行的太快，应适当稀释酶液;则应减少酶溶液的稀释倍数。
2、注意不要在检查反应程度时使各管溶液混杂。
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