支原体污染的特点及检验的相关知识
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性。可为圆形、丝状或梨形。
支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构。其中，央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中，央无颗粒群
或中，央束。
支原体代谢需固醇类物质、部分种类需要精，氨，酸、o2或葡萄糖，每一种支原体都有自身持点。多数支原体适合于偏碱条件下生存(ph7．6-8．0)，对酸耐受性差。对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。
支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊。多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落。
为确定有无支原体污染可做如下检测：
①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察，支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。
②荧光染色法：荧光染色用能与dna特异性结合的荧光染料hoechst 33258，可使支原体内含有的dna着色，染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的hanks液漂洗一下，用l：3醋酸甲酵固定10min，然后用生理盐水漂洗，置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1-2min，向细胞面滴加ph5．5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。
③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速，也可以利用透射电镜。
④dna分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高，但方法较为复杂。
支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5μm之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。
细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的dna,rna及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，95％以上是以下四种支原体：口腔支原体（m.orale）、精，氨，酸支原体（m.arginini）、猪鼻支原体（m.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（a.laidlawii），为牛源性。以上是最，常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最，突，出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如β-内酰胺类、万，古，霉，素等完，全不敏感；对多粘菌素（polymycin）、利，福，平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最，有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟，喹，诺，酮；其他类抗生素如氨基糖苷类、氯，霉，素对支原体有较小抑制作用，所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。
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或中，央束。
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支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊。多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落。
为确定有无支原体污染可做如下检测：
①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察，支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。
②荧光染色法：荧光染色用能与dna特异性结合的荧光染料hoechst 33258，可使支原体内含有的dna着色，染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的hanks液漂洗一下，用l：3醋酸甲酵固定10min，然后用生理盐水漂洗，置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1-2min，向细胞面滴加ph5．5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。
③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速，也可以利用透射电镜。
④dna分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高，但方法较为复杂。
支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5μm之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。
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组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最，突，出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如β-内酰胺类、万，古，霉，素等完，全不敏感；对多粘菌素（polymycin）、利，福，平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最，有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟，喹，诺，酮；其他类抗生素如氨基糖苷类、氯，霉，素对支原体有较小抑制作用，所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。
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